為什么有些細胞實驗無法重復(fù)？
為什么有的細胞在相當(dāng)長的時間里，都養(yǎng)不到*狀態(tài)？
為什么實驗室中，超過一株以上的細胞都時好時壞？
細胞生長緩慢、細胞變形、碎片增加、懸浮細胞容易成團、培養(yǎng)基提前變色、鏡下發(fā)現(xiàn)有小黑點……
 
如果排除了其他試劑選擇不當(dāng)、細胞株老化、細菌污染等原因，而仍有上述一種或幾種情況，則高度提示——你的細胞可能被支原體污染了！
 
 
圖. 電鏡下的支原體
 
支原體污染普遍存在
據(jù)美國數(shù)據(jù)統(tǒng)計，細胞發(fā)生支原體污染的幾率在 70% 以上。同時，由于支原體直徑很小，僅在 180nm~350nm 之間，只有通過電鏡才能看到，不易被實驗者肉眼發(fā)覺，支原體污染逐漸成為一個普遍存在的問題。
支原體污染的危害 
支原體污染是個循序的過程，普通抗生素對其無效。因此，支原體污染有多煩人，相信實驗人都領(lǐng)教過了。

 

1、細胞狀態(tài)不佳，生長速度慢，實驗無法推進。
2、細胞內(nèi) DNA、RNA 及蛋白表達發(fā)生改變，影響實驗結(jié)果，導(dǎo)致實驗數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確，時間、經(jīng)費的浪費。
3、一株污染的細胞成為實驗室的污染源，對工作區(qū)域以及培養(yǎng)箱和液氮罐造成污染，進而污染其他細胞，導(dǎo)致其他細胞繼發(fā)性污染，實驗受影響，數(shù)據(jù)無法重復(fù)，預(yù)期結(jié)果出不來。

如何有效把支原體趕出細胞？
對于已耗費很多時間、大量擴增起來的細胞，或經(jīng)過基因轉(zhuǎn)染、體外刺激等大量工作處理過的細胞，如果發(fā)現(xiàn)細胞被支原體污染了，怎么辦？由于前期工作量巨大，我們無法丟棄已有細胞。但由于價格原因，又無法使用那些昂貴試劑殺除細胞上的支原體，同時，實驗人員還需要清除細胞上的支原體污染，讓實驗得以往下推進，以zui終獲得準(zhǔn)確的實驗數(shù)據(jù)。
實驗者可選用對支原體的抑制劑，通過對細胞的前期處理，中期加藥，逐步通過 4 代左右的培養(yǎng)，從而將支原體污染*清除，確保試驗順利推進，結(jié)果準(zhǔn)確。*此類試劑眾多，締一生物生物周圍的實驗人做過很多嘗試，其中效果zui確切且性價比很高的當(dāng)屬德國 Minerva 公司的 ZellShield®祛除劑。


Zell Shield®是一種即用型新型復(fù)合抗生素，副作用極低，能有效地祛除細胞培養(yǎng)支原體、細菌、真菌污染。Zell Shield®使用方法簡單，直接加入培養(yǎng)基中保護細胞。
它的原理：通過抑制支原體增殖中某種蛋白的合成，達到抑制新的支原體增殖的目的。屬復(fù)合型的新型抗生素。它廣泛適用于細胞培養(yǎng)相關(guān)的科研和工業(yè)領(lǐng)域。

特點
1、適用范圍廣
普通細胞培養(yǎng)和原代細胞培養(yǎng)
2、無細胞毒性
目前，Zell Shield®對多種細胞系都無細胞毒性。
3、廣譜
祛除支原體效果明顯，同時對細胞內(nèi)和細胞外的革蘭氏陰性菌、革蘭氏陽性菌、病原蟲、真菌等污染亦可有效預(yù)防。
4、操作簡便
可直接加入到預(yù)處理的培養(yǎng)基或細胞中進行消毒。
5、穩(wěn)定性高
在細胞孵育期內(nèi)，Zell Shield®始終保持穩(wěn)定的活性。
6、低耐藥風(fēng)險
精心挑選的新型復(fù)合抗生素只有極低的耐藥風(fēng)險，多種抗生素聯(lián)合使用幾乎不會產(chǎn)生耐藥突變株。

操作步驟：
 

*步：研究發(fā)現(xiàn)，98% 的支原體污染發(fā)生在細胞間隙。因此，首先要把細胞消化下來，放入離心管，懸浮沖洗，離心，棄上清，反復(fù)三次。此時可將細胞上大部分的支原體去除，為進一步加藥抑制做好準(zhǔn)備。
第二步：培養(yǎng)液中加入 1% 的 ZellShield®，細胞進行正常培養(yǎng)。新的支原體增殖受到抑制，舊的支原體隨著細胞的換液逐步減少，通過 4 代左右的培養(yǎng)，細胞中的支原體基本可被*清除。
注：使用 ZellShield®時，不需使用鏈青霉素。
此試劑價格約 2200 元/50 ml，可保證大量細胞的實驗得以順利推進。
總之，細胞培養(yǎng)中，支原體污染發(fā)生頻繁。有時帶來的危害會造成實驗的巨大損失。應(yīng)經(jīng)常檢測和及時排除支原體污染，讓細胞在健康安全的環(huán)境下生長，為獲得準(zhǔn)確的實驗結(jié)果，打下良好的基礎(chǔ)。
附：關(guān)于德國 Minerva 公司
 

Minerva Biolabs GmbH 公司是世界的微生物污染控制公司，特別是支原體和軍團菌的技術(shù)和產(chǎn)品，在世界上遙遙。公司總部設(shè)立于德國柏林，專注微生物污染檢測與清除產(chǎn)品的研發(fā)和銷售。
締一生物生物 (Vian-saga), 是德國 Minerva 公司十年來在中國的*合作伙伴，一直被國內(nèi)生物界譽為「值得持續(xù)信賴的供貨商」。為國內(nèi)眾多科研機構(gòu)、生物藥廠提供的支原體污染祛除保障，同時，更以、可靠的*血清，為國內(nèi)細胞培養(yǎng)實驗室提供堅實有力的試劑支持。