污染是細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中面臨的主要問(wèn)題,細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中一旦被支原體污染將很難清除。本文締一生物/締一生物為您分析支原體污染細(xì)胞的癥狀。

支原體污染細(xì)胞后.培養(yǎng)液可不發(fā)生混濁.多數(shù)情況下細(xì)胞病理變化輕微或不顯著，細(xì)微變化也可由于傳代、換液而緩解.因此易被忽視。但個(gè)別嚴(yán)重者，可致細(xì)胞增殖緩慢.甚至從培養(yǎng)器皿脫落。

癥狀1：細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢甚至死亡？

被廣泛使用的細(xì)胞培養(yǎng)基，不僅給細(xì)胞提供支持和養(yǎng)分，對(duì)于支原體而言，也是天堂一般的存在。

與細(xì)胞培養(yǎng)高度重合的培養(yǎng)條件，注定了支原體要與細(xì)胞共同競(jìng)爭(zhēng)有限的生存資源。

早有研究表明[1]，一些支原體（包括為常見(jiàn)的人型支原體、發(fā)酵支原體、精氨酸支原體等），通過(guò)精氨酸脫亞胺酶分解精氨酸來(lái)供能。當(dāng)這些支原體混入細(xì)胞培養(yǎng)體系后，會(huì)與細(xì)胞爭(zhēng)精氨酸，導(dǎo)致細(xì)胞「吃不飽飯」，出現(xiàn)營(yíng)養(yǎng)不良的癥狀：生長(zhǎng)速率異常、活力下降、易脫壁等等。

而精氨酸又是細(xì)胞組蛋白的重要組成成分，缺乏精氨酸會(huì)嚴(yán)重影響組蛋白合成，引起染色體斷裂。再加上細(xì)胞處于長(zhǎng)qi饑餓的狀態(tài)，終導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)變慢甚至死亡。

支原體感染癥狀2：細(xì)胞變形、碎片增加、易聚團(tuán)、有小黑點(diǎn)？

經(jīng)過(guò)支原體的這一番操作，細(xì)胞結(jié)構(gòu)已經(jīng)被嚴(yán)重破壞，隨之而來(lái)的就是細(xì)胞形態(tài)改變、細(xì)胞易聚團(tuán)、大面積細(xì)胞凋亡制造的蛋白碎片（也就是培養(yǎng)基中的碎片和小黑點(diǎn)）

支原體也是如此——當(dāng)培養(yǎng)體系中感染了支原體并大量繁殖的時(shí)候，會(huì)向外排放代謝產(chǎn)物，影響體系中的PH，加快培養(yǎng)基變黃的速度。

支原體感染癥狀3：培養(yǎng)基易變黃？

綜上所述，如果你培養(yǎng)的細(xì)胞出現(xiàn)以下情況，基本可以確定是支原體感染了，不放心的話(huà)可以再配合支原體檢測(cè)試劑（檢測(cè)神器幫你揪出培養(yǎng)基中的支原體！）進(jìn)一步確認(rèn)。

除了影響細(xì)胞活力，支原體還會(huì)給細(xì)胞帶來(lái)的幾百種基因表達(dá)的改變,包括編碼受體、離子通道、生長(zhǎng)因子的基因和癌基因等方面[4]。它包含高度富含免疫原性的脂蛋白，可以錨定在胞膜的外表面，被TLR2等免疫細(xì)胞的受體識(shí)別。激活NF-kB途徑，進(jìn)一步導(dǎo)致細(xì)胞活化[5]，偏離終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

Minerva Biolabs PCR Clean™

通過(guò)中和以及降解的原理，可快速有效地祛除任何物體表面的DNA、RNA以及DNA酶、RNA酶的污染，使它們快速的降解，從而確保PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確。

使用方法也十分簡(jiǎn)單：

將PCR Clean™噴在操作臺(tái)表面，反應(yīng)1分鐘后，即可用干凈紙巾擦干試劑。

注：如果沒(méi)有擦拭干凈，液體揮發(fā)后表面可能有白色殘留，影響美觀。此時(shí)可用噴壺噴灑蒸餾水到白色殘留處，然后擦拭即可。

針對(duì)移液器需要去除DNA污染，可按照說(shuō)明書(shū)拆開(kāi)移液器，將桿軸浸泡在PCR Clean™噴霧劑中，1分鐘后取出后用水沖洗，晾干，重新組合。

PCR Clean™的優(yōu)點(diǎn)：

1、快速：1分鐘起效。

2、方便：噴霧劑可直接使用。

3、保護(hù)實(shí)驗(yàn)人員，避免接觸DNA污染。

4、穩(wěn)定性強(qiáng)：PCR Clean™耐熱，可在室溫保存至少一年。低溫可能會(huì)形成沉淀，但在37℃迅速溶解。即使在65°C條件下存放兩周，也不會(huì)影響噴霧劑的祛除效果。

5、成分安全：PCR Clean™含有少量的磷酸和乙氧基醇，成分非堿性，無(wú)致癌性。